Комплекс шаперону GroEL з флуоресцеїн-міченим денатурованим пепсином: стехіометрія та роль лігандів
Анотація
Одной из основных функций молекулярного шаперона GroEL (14-ти субъединичного белка клеток E.coli) является связывание полипептидных цепей, не имеющих жесткой упаковки боковых групп, и предотвращение их неспецифической агрегации. В настоящей работе с помощью гель-фильтрации и флуориметрического титрования исследовано взаимодействие GroEL с флуоресцеин-меченым ненативным пепсином (рН 7.5) в отсутствие и в присутствии различных лигандов GroEL (ионов Mg2+ АДФ, АТФ и 7-ми субъединичного ко-шаперона GroES). Показана определяющая роль ионов Mg2+ в образовании комплекса GroEL с ненативным пепсином при умеренной ионной силе раствора (100 mM KCl). Адениловые нуклеотиды (АДФ или АТФ) в присутствии ионов Mg2+уменьшают сродство GroEL к ненативному пепсину, и это уменьшение зависит как от природы нуклеотида и его концентрации, так и от присутствия ко-шаперона GroES. Флуориметрическое титрование показало, что в присутствии ионов Mg2+одна молекула GroEL связывает две молекулы денатурированного пепсина со средней константой диссоциации Kdiss=3.6 •10-9M.
Завантаження
Посилання
2. Gething M. J. and Sambrook J. //Nature. 1992. 355. P. 33-45.
3. Martin J., Langer T., Boteva R. et al. //Nature 1991. 352. P. 36-42.
4. Viitanen P.V., Gatenby A.A. and Lorimer G.H. // Protein Sci. 1992. J. P. 363-369.
5. Lindquist S. and Craig E.A. ///Annu. Rev. Genet. 1988. 22. P. 631-677.
6. Christman M.F., Morgan R.W., Jacobson F.S. et al. //Cell. 1985. 41. P. 753-762.
7. Schlesinger M. J. // J. Biol. Chem. 1990. 265. P. 12111-12114.
8. Fenton W.A. and Horwich A.L. // Protein Sci. 1997. 6. P. 743-760.
9. Hayer-Hartl M.K., Ewbank J. J., Creighton T.E. et al. // EMBO J. 1994.13.P. 3192-3202.
10. Lin Z., Schwartz F.P. and Eisenstein E.//J. Biol. Chem. 1995.270 P. 1011-1014.
11. Viitanen P.V., Lubben T.H., Reed J. et al. // Biochemistry. 1990. 29. P. 5665-5671.
12.Katsumata K., Okazaki A., Tsurupa G.P. et al. // J. Mol. Biol. 1996. 264. P. 643-649.
13.Todd M .I., Viitanen P.V. and Lorimer G.H. // Science. 1994. 265. P. 659-666.
14. Marchenko N.Yu., Marchenkov V.V., Kotova N.V. et al. //Ukr. Biokhim. Zh. 2003. 75.
P. 88-94.
15. Goloubinoff P., Christeller J.T., Gatenby A.A. et al. //Nature. 1989. 342. P. 884-889.
16. Chen J., Walter S., Horwich A.L. et al. // Nat. Struct. Biol. 2001.8. P. 721-728.
17. Aoki K., Taguchi H., Shindo Y et al. // J. Biol. Chem. 1997. 272. P. 32158-32162.
18.Lissin N.M., Venyaminov S.Y. and Girshovich A.S. //Nature. 1990. 348. P. 339-342.
19. Laemmli U.K //Nature. 1970. 227. P. 680-685.
20. Lakowicz J.R. Principles of fluorescence spectroscopy. Kluwer Academic / Plenum Publishers, New York. 1999.
21. Schulz G.E., Schirmer R.H. Principles of protein structure. Springer-Verlag, New York - Heidelberg - Berlin:, 1979.
22. Pack C.G., Nishimura G., Tamura M. et al. // Cytometry. 1999. 36. P. 247-253.
23. Hayer-Hartl M K., Martin J. and Hartl F.U. // Science. 1995. 269. P. 836-841.
Автори, які публікуються у цьому журналі, погоджуються з наступними умовами:
- Автори залишають за собою право на авторство своєї роботи та передають журналу право першої публікації цієї роботи на умовах ліцензії Creative Commons Attribution License, котра дозволяє іншим особам вільно розповсюджувати опубліковану роботу з обов'язковим посиланням на авторів оригінальної роботи та першу публікацію роботи у цьому журналі.
- Автори мають право укладати самостійні додаткові угоди щодо неексклюзивного розповсюдження роботи у тому вигляді, в якому вона була опублікована цим журналом (наприклад, розміщувати роботу в електронному сховищі установи або публікувати у складі монографії), за умови збереження посилання на першу публікацію роботи у цьому журналі.
- Політика журналу дозволяє і заохочує розміщення авторами в мережі Інтернет (наприклад, у сховищах установ або на особистих веб-сайтах) рукопису роботи, як до подання цього рукопису до редакції, так і під час його редакційного опрацювання, оскільки це сприяє виникненню продуктивної наукової дискусії та позитивно позначається на оперативності та динаміці цитування опублікованої роботи (див. The Effect of Open Access).
