Вплив різних концентрацій кріопротектора ДМСО на збереженість, життєздатність та вміст активних форм кисню в ядровмісних клітинах кордової крові при кріоконсервуванні

О. Є. Макашова
Л. О. Бабійчук
О. Л. Зубова
П. М. Зубов

Ключові слова: кордова кров, ядровмісні клітини, кріоконсервування, активні форми кисню

Анотація

В роботі представлені результати досліджень щодо відпрацювання підходів з оцінки кількості ядровмісних клітин (ЯВК) кордової крові з надмірним вмістом активних форм кисню (АФК) при використанні флуоресцентного барвника 2',7'-дихлордигідрофлуоресцеїн діацетату методом проточної цитофлуориметрії. Показано, що як еквілібрація ЯВК протягом однієї години з різними концентраціями проникаючого кріопротектора ДМСО, так і їх кріоконсервування призводять до зниження збереженості та життєздатності клітин, що може бути викликано пригніченням антиоксидантної системи клітин і, як наслідок, накопиченням надмірної кількості АФК. Отримані результати продемонстрували необхідність розробки технологій кріоконсервування з додаванням в кріозахисне середовище антиоксидантів з метою запобігання розвитку окисного стресу в клітинах.

Завантаження

##plugins.generic.usageStats.noStats##

Посилання

Armitage S. Cord blood banking standards: autologous versus altruistic // Front. Med. (Lausanne). – 2015. –no 2. – P.94.

Basic cell culture. A practical approach / Ed. J.M.Davis. – Oxford: Oxford University Press. – 2002. – 382p.
Bartosz G. Use of spectroscopic probes for detection of reactive oxygen species // Clin. Chim. Acta. – 2006. – Vol.368. – Р. 53–76.

Chen G., Yue A., Ruan Z. et al. Comparison of the effects of different cryoprotectants on stem cells from umbilical cord blood // Stem Cells Int. – 2016. – Vol.2016. – Article ID 1396783.

Chen X., Zhong H.Z., Xu Z. et al. 2',7'-Dichlorodihydrofluorescein as a fluorescent probe for reactive oxygen species measurement: Forty years of application and controversy // Free Radical Research. – 2010. – Vol.44, no 6. – P. 587–604.

Fry L.J., Querol S., Gomez S.G. et al. Assessing the toxic effects of DMSO on cord blood to determine exposure time limits and the optimum concentration for cryopreservation // Vox Sang. – 2015. – Vol.109, no 2. – P. 181–190.

Hayakawa J., Joyal E.G., Gildner J.F. et al. 5% dimethyl sulfoxide (DMSO) and pentastarch improves cryopreservation of cord blood cells over 10% DMSO // Transfusion. – 2010. – Vol.50 (10). – P. 2158–2166.
Kalyanaraman B., Darley-Usmar V., Kelvin J.A. Davies et al. Measuring reactive oxygen and nitrogen species with fluorescent probes: challenges and limitations // Free Radic. Biol. Med. – 2012. – Vol.52, no 1. – Р. 1–6.

Khomenko V.I., Bychkov V.V., Bazyka D.A. State of development of hematopoietic stem cell transplantation in the Europe and world // Lik. Sprava. – 2014. – Vol. 7–8. – P. 117–121.

Kim K.M., Huh J.Y., Hong S.S., Kang M.S. Assessment of cell viability, early apoptosis, and hematopoietic potential in umbilical cord blood units after storage // Transfusion. – 2015. – Vol.55 (8). – P. 2017–2022.

Passweg J.R., Baldomero H., Peters C. et al. Hematopoietic SCT in Europe: data and trends in 2012 with special consideration of pediatric transplantation // Bone Marrow Transplant. – 2014. – Vol.49, no 6. – Р. 744–750.

Rhee S.G., Chang T.S., Jeong W., Kang D. Methods for detection and measurement of hydrogen peroxide inside and outside of cells // Mol. Cells. – 2010. – Vol.29, no 6. – Р. 539–549.

Schmid I., Krall W.J., Uittenbogaart C.H. Dead cell discrimination with 7-amino-actinomycin D in combination with dual color laser flow cytometry // Cytometry. – 1992. – Vol.13. – P. 204–208.

Schieber M., Chandel N.S. ROS function in redox signaling and oxidative stress // Curr. Biol. – 2014. – Vol.24 (10). – P. 453–462.

Shen W.J., Hsieh C.Y., Chen C.L. et al. A modified fixed staining method for the simultaneous measurement of reactive oxygen species and oxidative responses // Biochem. Biophys. Res. Commun. – 2013. – Vol.430, no 1. – P. 442–447.

Soh N. Recent advances in fluorescent probes for the detection of reactive oxygen species // Anal. Bioanal. Chem. – 2006. – Vol.386. – Р. 532–543.

Tetz L.M., Kamau P.W., Cheng A.A. et al. Troubleshooting the dichlorofluorescein assay to avoid artifacts in measurement of toxicant-stimulated cellular production of reactive oxidant species // J. Pharmacol. Toxicol. Methods. – 2013. – Vol.67, no 2. – Р. 56–60.

Yamaguchi R., Takanashi M., Ito M. et al. Plasticizer concentration in cord blood cryopreserved with DMSO // Bone Marrow Transplant. – 2014. – Vol.49 (1). – P. 157–158.

Wardman P. Fluorescent and luminescent probes for measurement of oxidative and nitrosative species in cells and tissues: progress, pitfalls, and prospects // Free Radic. Biol. Med. – 2007. – Vol.43. – Р. 995–1022.